市場監(jiān)管總局發(fā)布《畜肉中卡拉膠的測定》食品補(bǔ)充檢驗方法

中國質(zhì)量新聞網(wǎng)訊  6月14日，國家市場監(jiān)管總局官網(wǎng)發(fā)布公告稱，按照《食品補(bǔ)充檢驗方法工作規(guī)定》有關(guān)規(guī)定，《畜肉中卡拉膠的測定》食品補(bǔ)充檢驗方法已經(jīng)國家市場監(jiān)督管理總局批準(zhǔn)，現(xiàn)予發(fā)布。

畜肉中卡拉膠的測定（BJS 201804）

附件

畜肉中卡拉膠的測定

（BJS201804）

1　范圍

本方法規(guī)定了生、鮮肉中卡拉膠的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。

本方法適用于生鮮肉、冷卻肉、凍肉中卡拉膠的定量測定。

2　原理

樣品經(jīng)勻漿后，用鹽酸溶液處理，其中的卡拉膠降解生成特征性寡糖，用液相色譜-串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜檢測寡糖含量，外標(biāo)法定量。

3　試劑和材料

本方法所用水為符合GB/T 6682規(guī)定的一級水。

3.1　試劑

3.1.1乙腈（CH₃CN）：色譜純。

3.1.2甲酸銨（HCOONH₄）：色譜純。

3.1.3鹽酸（HCl）：優(yōu)級純。

3.2　試劑配制

10 mM甲酸銨水溶液：稱取甲酸銨（3.1.2）0.63 g，用水溶解并定容至1000 mL。

3.3　標(biāo)準(zhǔn)品

卡拉膠：食品添加劑級。

3.4　標(biāo)準(zhǔn)儲備液的配制

稱取卡拉膠0.1 g（精確至0.1 mg），用60℃溫水溶解，轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，冷卻至室溫后，用水定容至刻度。此溶液濃度為10 mg/mL，現(xiàn)用現(xiàn)配。

4　儀器和設(shè)備

4.1　高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源（ESI源）。

4.2　分析天平：感量為0.0001g。

4.3　分析天平：感量為0.01g。

4.4　離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥4 000 r/min。

4.5　渦旋混合器。

4.6　食品粉碎機(jī)。

4.7　勻漿機(jī)。

4.8　恒溫水浴。

5　試樣制備和保存

依據(jù) GB/T9695.19-2008規(guī)定的方法取樣。樣品剔除脂肪組織，瘦肉部分（＞100 g）用食品粉碎機(jī)（4.6）粉碎混勻。

混勻好的樣品分成兩份，分別作為試樣（＞50 g）和留樣（＞50 g），裝入潔凈容器中，密封并標(biāo)記，于 -18 ℃保存。

6　試樣處理

6.1基質(zhì)加標(biāo)工作液

稱取4份打碎混勻的空白基質(zhì)（確定不含卡拉膠的畜肉）各10 g（精確至0.01 g）于50 mL離心管中，分別加入標(biāo)準(zhǔn)儲備液（3.4）0.1 mL，0.2 mL，0.3 mL，0.4 mL，加入水使液體的總體積為23 mL，10000 rpm勻漿1 min，加入2 mL鹽酸（3.1.3），加蓋后渦旋30 s，置于80℃水浴中20 min，每10 min取出振搖一次。取出冷卻后，4000 rpm離心5 min，取上清液1 mL，用乙腈1:1稀釋后，過濾膜（0.22 mm,有機(jī)相），待測。

6.2 樣品待測液

稱取10 g試樣（精確至0.01 g）于50 mL離心管中，加入23 mL水，10000 rpm勻漿1 min，加入2 mL鹽酸（3.1.3），加蓋后渦旋30 s，置于80℃水浴中20min，每10 min取出振搖一次。取出冷卻后，4000 rpm離心5 min，取上清液1 mL，用乙腈1:1稀釋后，過濾膜（0.22 mm,有機(jī)相），待測。

7　測定

7.1參考液相色譜條件

7.1.1色譜柱：BEH Amide柱（粒徑1.8 μm，2.1 mm ×50 mm），或性能相當(dāng)者；

7.1.2 進(jìn)樣量：5 μL；

7.1.3 柱溫：30℃；

7.1.4 流速：0.3 mL/min；

7.1.5流動相：A相：10 mM甲酸銨水溶液（3.2）；B相：乙腈（3.1.1）。梯度洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序

7.2參考質(zhì)譜條件

7.2.1 離子化方式：電噴霧電離；

7.2.2掃描方式：負(fù)離子掃描；

7.2.3 檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）。

霧化氣、鞘氣、碰撞氣均為高純氮氣或其他合適氣體，源內(nèi)裂解電壓（fragmentorVoltage）、碰撞能量（CE）等參數(shù)使用前應(yīng)調(diào)節(jié)，使質(zhì)譜靈敏度達(dá)到檢測要求，參考條件詳見附錄A。

監(jiān)測離子對信息參見附錄A中的表A.1和附錄C中的表C.1。

7.3定性測定

在相同實驗條件下測定基質(zhì)加標(biāo)工作液和樣品待測液，若樣品溶液中檢出色譜峰的保留時間與相應(yīng)基質(zhì)加標(biāo)工作液色譜峰的保留時間一致，且樣品溶液的質(zhì)譜離子對相對豐度與濃度相當(dāng)基質(zhì)加標(biāo)工作液的質(zhì)譜離子對相對豐度相比較，相對離子豐度（k）的相對偏差不超過表2規(guī)定的范圍，則可判定樣品中存在卡拉膠。

表2 定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差

7.4定量測定

以基質(zhì)加標(biāo)工作溶液中含卡拉膠的質(zhì)量為橫坐標(biāo)，以定量離子的峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。按外標(biāo)法計算得到待測樣品中卡拉膠的含量。

在上述色譜和質(zhì)譜條件下，基質(zhì)加標(biāo)工作液的卡拉膠降解產(chǎn)物提取離子色譜圖見附錄B 中的圖B.1。

7.5 空白試驗

除不加試樣外，均按樣品待測液（6.2）同法操作。

8　結(jié)果計算

結(jié)果按下式計算：

式中：

X — 試樣中卡拉膠的含量，單位為克每千克（g/kg）；

m — 由基質(zhì)加標(biāo)工作曲線計算出的供試品溶液中卡拉膠的含量，單位為毫克（mg）；

M — 試樣的質(zhì)量，單位為克（g）。

以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。

9方法精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的15％。

10方法檢出限和定量限

本方法對卡拉膠檢出限為0.02 g/kg；定量限為0.06 g/kg。

11　方法準(zhǔn)確度

本方法卡拉膠在0.1～0.4 g/kg添加濃度范圍內(nèi)，回收率為80%~120%。

12　陽性結(jié)果的確證

檢測到的陽性結(jié)果，可使用高分辨質(zhì)譜方法進(jìn)行確證。

使用與串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜法相同的色譜參數(shù)，進(jìn)行一級質(zhì)譜信息采集?？捎糜诖_證的離子列表見附錄C中的表C.2。

當(dāng)質(zhì)譜中出現(xiàn)2種或2種以上列表中的單電荷離子或雙電荷離子時，可確證陽性結(jié)果。

A  

A           

附錄A

參考質(zhì)譜條件

負(fù)離子模式掃描質(zhì)譜條件

a)       離子源：電噴霧離子源（ESI源）；

b)       檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；

c)        毛細(xì)管電壓： -4000 V（ESI-）；

d)       干燥氣溫度：200℃；

e)       干燥氣流量：5 L/min

f)        霧化氣壓力：30 psi；

g)       鞘氣溫度：280℃；

h)       鞘氣流量：8 L/min；

上述參考質(zhì)譜條件僅供參考，當(dāng)采用不同質(zhì)譜儀器時，儀器參數(shù)可能存在差異，測定前應(yīng)將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最佳。

表A.1　卡拉膠降解產(chǎn)物的定性離子對、定量離子、碎裂電壓和碰撞能量

注：1、標(biāo)*的為定量離子；2、以上兩對MRM均可使用，測定中可使用靈敏度較高者，本方法給出的檢出限、定量限、靈敏度等指標(biāo)是基于以403為母離子的離子對數(shù)據(jù)。